细胞学是目前兽医当中非常重要但仍未被广泛运用的诊断手段，它能快速、简单的收集大量的诊断信息，且价格低廉，与粪便漂浮法，血涂片，血清生化/血常规等检查手段类似。Christopher等人曾在美国兽医学会期刊上撰文表示：“皮肤/皮下细胞学在诊断时是最为精确的，而肝脏的细胞学诊断精确性最低。”不仅如此，Ruocco等人还说：“尽管有快速而稳定的结果，且适用于多种临床情况，但是脱屑性细胞学很少应用于皮肤病的诊断。”掌握获取细胞学样本的方法以及分析方法对于动物健康、疾病管理和整体预后来说都是非常关键的。
样本的获取
耳道
从耳道获取样本最好的方法是使用棉签；然而，耳道的健康状况可能会限制你采样的部位。举个例子，如果一只患有耳道末端增生的犬，其狭窄程度可能导致棉签难以伸入耳道。从更为狭窄的耳道中采样可能需要5号Fr的红橡胶导管。如果犬耳道比较特殊，鼓膜破裂或者缺失，也许可以中耳取样。在这些情况下，可以在动物全身麻醉后使用红色橡胶管和公猫导管来采样。如果鼓膜是完整的，可以使用脊椎穿刺针进行鼓膜切开术。
尝试在垂直耳道和水平耳道的交界处获取样品，这大概是在没有耳镜的情况下我们能观察耳道最深的地方。
将采到的样本滚动涂抹在载玻片。我喜欢写上“R”表示右边，“L”表示左边来区别不同侧耳道获得的样本（图片1）。
图1、耳部细胞学：右侧和左侧标记
Griffin等人发现细胞学检测中，耳道分泌物涂片在染色之前，有没有热固定并不会影响镜检时马拉色菌的数量。我本人倾向于热固定，然后进行快速染色（例如diff-quick染色法)。
爪部的采样
有两种方法可以进行爪部皮肤褶皱处（角质层）的取样：
用载玻片的边缘以30-45°的角度从远端到近端用舀水样的动作刮取皮肤碎屑（通常是蜡样物质）。
将棉签折断，木棍的折断切口应该是斜面的。用斜面在爪部近端或皮肤褶皱的周围轻柔刮取或挑取物质，然后涂抹到载玻片上（图2）。这种方法更受欢迎，因为在这些部位直接使用载玻片可能有碎裂的风险。分泌物/碎屑的量将会非常的少。
图2、爪部褶皱处的采样，所用载玻片应该进行热固定和快速染色。
皮肤表面
根据我的经验，在日常转诊病例中，皮肤细胞学是最容易忽视的检查手段。我发现皮肤直接印压涂片是最具有诊断价值的方法。
用载玻片的边缘以30-45°角度刮取皮肤进行采样。这个方法适用于爪部，腹部，疱疹，丘疹，面部褶皱，和其他区域（图3）。
图3、刮取皮肤
胶带粘取样本对于那些非常干燥或者载玻片不好接触的部位会更有效，比如指缝间，脸部或尾部褶皱，眼部周围。
用清洁的透明胶带直接按压粘取想采集病料的区域。
仅通过染色剂和复染色剂（红或紫）进行染色，然后将胶带粘在载玻片上再做分析。
注意固色剂可能会去除样本中的黏附物质。
细胞学结果的解读
基础概念
永远从低倍镜开始！在细胞学观察阶段最常见的失误是直接使用倍高倍镜。从4倍镜开始先确定载玻片需要观察的特定区域，之后再用高倍镜。这样还能够发现一些高倍镜可能遗漏的发现，例如棘层松懈细胞和蠕形螨（图4和图5）。
由于倍数放大了，亮度也要适当调高。当观察蠕形螨或真菌孢子时，调低聚光器避免强光会“灼烧”这些微生物。
图4、皮肤棘层松懈细胞
图5、蠕形螨
炎性细胞
炎性细胞几乎可见于所有皮肤细胞学中，耳道及爪部细胞学检查中偶尔也能发现。不同类型的炎性细胞有助于鉴别诊断，比如天疱疮，皮肤狼疮，粘膜皮肤脓皮病，甚至是过敏。
嗜中性粒细胞
嗜中性粒细胞是对抗传染性微生物的急性炎症细胞，也是脓汁的主要内容物。应该筛查胞内细菌，因为这些细菌的存在是皮肤感染的真实含义。有大量细菌出现但没有胞内细菌的存在，这可能是免疫抑制的结果（例如，库兴综合症，甲状腺功能减退，肿瘤）或是细菌的过度生长。鉴于目前对抗菌药物耐药性的担忧，我建议这种病例第一步先用抗微生物药物做局部治疗（例如：氯已定，微粒化银抗菌剂，TrizEDTA）。嗜中性粒细胞释放了许多导致炎症和组织损伤的蛋白水解酶（图6）。
图6、嗜中性粒细胞
嗜酸性粒细胞
嗜酸性粒细胞充满了红染的（嗜酸性）颗粒（图7）。嗜酸性粒细胞产生大量的细胞因子和细胞介质来杀死微生物并吸引其他细胞，例如肥大细胞。这些细胞也具备吞噬功能，能够吞噬细菌和真菌。皮肤细胞学中发现嗜酸性粒细胞表明存在寄生虫、真菌或食物过敏的可能。嗜酸性粒细胞很少出现在异位性皮炎的犬中，但在猫很常见。
图7、嗜酸性粒细胞
淋巴细胞
淋巴细胞通常在皮肤疾病的较晚过程中出现，数量也不会很多。可能会见到小、中、大淋巴细胞。这些细胞通过释放各种信息分子或细胞因子诱导其他细胞的活化（如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、角化细胞）。大淋巴细胞有时会出现在淋巴细胞瘤的患犬中（图8）。
图8、非典型淋巴细胞（符合皮肤淋巴细胞瘤）
肥大细胞
病程发展后期中也会发现肥大细胞（图9）。它们是组胺的主要生产者，并且与大多数过敏皮肤病有关。通常只出现在肥大细胞瘤的溃疡区域。
图9、肥大细胞（图中央）
核流
当细胞在取样时破裂，细胞学检查时通常可观察到细胞核内容物（DNA）。核流（就是细胞核内容物像高压水枪喷出的水流一样）看起来像嗜酸性物质的细长线状结构（图10）。除了说明细胞在取样时发生破裂以外，核流并无其他任何指示意义。但它可以勾勒出真菌孢子、细菌和酵母菌的轮廓，所以可以在有大量核流的区域寻找这些微生物。
图10、核流
寄生虫
如果感染严重的话，细胞学检查中可以看到蠕形螨，耳螨，疥螨或其他螨虫。这些体积较大的生物最好在4X到10X镜下观察。它们并不常见，但如果发现，极具诊断价值。
真菌
皮肤真菌（癣菌）的真菌孢子可以在嗜中性粒细胞内发现，也可以是游离的，也可以在核流中出现。这些体积非常小的圆形微生物有一个清晰光晕和嗜碱性的中心部位（图11）。它们大小大约是普通红细胞的一半。
图11、真菌孢子
酵母菌
普遍存在两种酵母菌：马拉色菌在美国比念珠菌更常见，而念珠菌在欧洲更常见。马拉色菌被描述为外形像花生、雪人、脚印或保龄球的嗜碱性生物。这些生物被定义为宽基出芽酵母菌。
细菌
细菌是我在细胞学检查中发现的最常见的传染性微生物。两种形状的最为常见：球形和杆状。球菌是一种嗜碱性的圆形细菌，可以孤立分布，也可以成团或者大片分布（图10）。如果发现胞内球菌，即可表明感染确实存在。杆菌通常单个存在或以首尾相连的二倍体形式分布（图12）。球菌最常见的是葡萄球菌或链球菌。杆菌通常是大肠杆菌，假单胞杆菌，或克雷伯氏菌。记住，快速染色会把所有细菌染成紫色；不能区分革兰阳性菌或革兰阴性菌。细菌培养应该随时进行，如果细胞学上观察到了杆菌。当显微镜精细聚焦的时候，细菌常常聚焦或失焦，而黑色素颗粒具有折射性。
图12、杆菌和炎性细胞
黑色素颗粒
黑色素颗粒通常被误认为是细菌，正常可见于皮肤的着色区域。它们呈金黄色或者褐色，大多是杆状；它们在细焦点聚焦或失焦时会表现折射/反射性的特点（图13）。黑色素颗粒通产附着于角化细胞，但也可以在涂片中呈游离状态。
图13、黑色素颗粒
角化细胞
大多数角化细胞都是八角形的鳞状上皮细胞组成的。角化细胞可能会呈现一些有趣的特性，正常的或是异常的，如包括透明角质颗粒或圆形的棘层松懈细胞。
透明角质颗粒
这些颗粒存在于未成熟皮肤细胞的颗粒层中，当完全成熟时参与“粘合”功能将细胞聚集在一起。所有动物都有这类颗粒，在长期受刺激的动物（例如，过敏的犬猫）的角质细胞中可能会见到这些颗粒。透明角质颗粒是大号的嗜酸性颗粒。犬含有圆形颗粒，猫含有杆状颗粒（类似嗜酸性粒细胞，图14）。
图14、透明角质颗粒
皮肤棘层松懈细胞
这些角化细胞在表皮更深处失去了细胞间的连接，通常可见于免疫介导性疾病（如天疱疮）的动物。偶然情况下，严重的细胞感染和皮肤癣菌会导致这些细胞生长。皮肤棘层松懈细胞是“煎蛋”形状，细胞核位于中央呈极度嗜碱性（图4）。这些特征对于我们识别细胞非常重要，在任何动物中都应视为异常情况。
ChrisReeder,DVM,DACVD
BluePearlVeterinaryPartners,Franklin,Tennessee
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